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細胞凍存為了減少我們在細胞培養時的細胞代謝頻率，從而進行長期儲存的一種細胞培養技術，是細胞保存的主要方法之一，起到了細胞保種的作用。那么，細胞凍存的需要用到哪些細胞培養耗材，其凍存步驟又是怎樣的呢？利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。細胞凍存需要用到的細胞培養耗材包括凍存管、細胞培養瓶、吸管、移液管等。凍存步驟如下：

1. 待凍存細胞懸液的制備

（1）按常規方法消化處于對數生長期的細胞培養物，制備單細胞懸液，并計算細胞總數；

（2）將細胞懸液以800～1000r/min離心5min，去上清夜；

（3）向細胞沉淀物中加入冷凍保護液，輕輕吹打混勻，使細胞密度達1×106～1×107個/ml；

（4）按每管1～1.5ml的量分裝于凍存管內，擰緊管蓋；

（5）最后將凍存管上做好標記，包括細胞代號及凍存日期。

2. 分級冷凍

（1）首先將凍存管放入普通冰箱冷藏室（4～80C），放置時間在半小時到一小時左右；

（2）后續將凍存管置于普通冰箱冷凍室（-100C～-200C），此次時間在半小時到一個小時左右；

（3）之后將凍存管轉入低溫冰箱（-300C），凍存時間維持在半小時左右；

（4）然后將凍存管轉移到超低溫冰箱（-700C～-800C），放置一夜；

（5）最后將凍存管投入液氮保存。

3. 記錄

做好凍存記錄。記錄內容包括凍存日期、細胞代號、凍存管數、凍存過程中降溫的情況、凍存位置以及操作人員，此時可以選用富道細胞的SBS三碼合一凍存管，記錄更加簡單。