我們在細胞培養過程中經常會使用凍存管進行細胞凍存,以此來保存細胞和減少細胞活力,當我們重新使用凍存細胞的時候就需要進行復蘇而在實際操作中,凍存細胞要進行復蘇,再培養傳代。復蘇細胞一般采用快速融化法。以保證細胞外結晶快速融化,以避免慢速融化水分滲入細胞內,再次形成胞內結晶損傷細胞。

我們在復蘇的大概流程為:佩戴好實驗物品如眼鏡、手套等,從低溫液氮罐中取出需要復蘇的凍存管。迅速放入38℃水浴中,并不時搖動,在1分鐘內使其完全融化,然后在無菌下取出細胞。然后進行離心之后棄去上層液,在接種在細胞培養瓶或者其他耗材中。在進行觀察,來調整。之后就可以正常培養細胞。
需要注意的是細胞復蘇操作時,應注意融化凍存細胞速度要快,可不時搖動安瓿或冷凍管,使之盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。這樣復蘇的凍存細胞存活率高,生長及形態良好。然而,由于凍存的細胞還受其他因素的影響,有時也會有部分細胞死亡。此時,可將不貼壁、飄浮在培養液上(已死亡)的細胞輕輕倒掉,再補以適量的新培養液,也會獲得較為滿意的結果。
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