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今天富道細(xì)胞給大家介紹一種我們?cè)诩?xì)胞制備中常見的細(xì)胞那就是小鼠胚胎成纖維細(xì)胞此胚胎干細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)最理想的飼養(yǎng)層，用于小鼠、人來(lái)源胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)，也廣泛誘導(dǎo)多潛能干細(xì)胞（iPS）培養(yǎng)的飼養(yǎng)層細(xì)胞。今天富道細(xì)胞分享一下細(xì)胞工廠對(duì)小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的應(yīng)用。

我們?cè)谑褂眉?xì)胞工廠培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)候，要先進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇。將凍存的 MEF 從液氮中取出，浸入 37 ℃ 水浴，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，注意凍存管蓋不要沒(méi)入水中。當(dāng)只剩一個(gè)小冰晶時(shí)，將凍存管從水浴中取出。將凍存管浸入 95％ 乙醇浴消毒，在無(wú)菌超凈臺(tái)中晾干。

將細(xì)胞從凍存管中轉(zhuǎn)入離心管中，逐滴加入 MEF-C 培養(yǎng)基，輕輕混勻（5）200 g 離心 5 min，去除凍存液。去除上清液，將細(xì)胞團(tuán)輕輕拍散，加MEF-C重懸細(xì)胞。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)明膠包被的細(xì)胞工廠中。放入培養(yǎng)箱，每天觀察細(xì)胞工廠內(nèi)的細(xì)胞密度。

MEF 細(xì)胞的在細(xì)胞工廠中的傳代（按 1:5 傳代）：吸棄細(xì)胞工廠內(nèi)添加的 MEF-C。加PBS，洗一遍。吸棄 PBS。加入胰蛋白酶-EDTA 溶液，放置一段時(shí)間后直至鏡下觀察，看細(xì)胞間接觸由致密逐漸變松散。輕搖晃細(xì)胞工廠內(nèi)細(xì)胞，直至MEF細(xì)胞從細(xì)胞工廠貼壁表面脫離。加 MEF-C 中止胰蛋白酶消化。混勻細(xì)胞懸液，加入 MEF-C。混勻后分裝到每個(gè)新的細(xì)胞工廠中。