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我們在使用細胞培養瓶培養時由于RAW 264.7細胞可以作為很多基礎醫學領域和藥理學領域的研究模型，所以每個人的研究方向不同，所以細胞培養方式也有差別，今天富道細胞來跟大家說一下我們對該細胞的一些小心得。

由于該細胞生長快，條件好時24h內能分裂兩次至少。而且喜歡扎堆，所以2天就要傳代，不是真的空間不夠，而是細胞都擠在一起。所以，如果細胞培養瓶里細胞密度小，培養基2天還是很好，可是細胞卻扎堆，需要進行傳代了，就會造成培養基的浪費，所有我們可以保持瓶中的細胞密度在20~40%左右，分裂2~3次就傳代，這時剛好培養基發黃。細胞太少就浪費培養基了。

這個細胞是巨噬細胞，就是M0，未分化的巨噬細胞，外觀是圓形高折光，貼壁非常快，10min內能貼80%，也容易脫落，無胰酶拍打200下或者胰酶室溫30s輕輕拍打都能下來60~80%，不過無胰酶吹打是吹不下來的。

如果培養條件不好，它會分化，變成多邊形，從高折光的小圓亮點變成灰色的一小片，變得粘附非常緊，所以我覺得應該控制消化時間和拍打力度，不要過分追求把所有細胞都弄下來，這樣一來影響狀態好的未分化圓形細胞活力，另一方面會把狀態不好的分化細胞弄下來，不如縮短胰酶時間到1min內，把分化過的高粘附細胞留在瓶里，正好起到對細胞分化狀態的選擇作用。

我們進行傳代時首先無胰酶拍打，能弄下來約50%的細胞，然后加胰酶拍打30s，鏡下觀察，一般30s剛剛好，剩下未脫落的都是分化的形態不好的細胞，這種細胞繼續培養，如果要回到圓形，可以用胰酶消化后傳代。