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大腸菌群是指一群能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭陰性無芽胞桿菌，在實際應用中常用它作為食品是否受到糞便污染的指標。在所有的檢測方法中，利用細胞培養瓶進行檢測是比較常用的一種。操作步驟如下：

1.采樣及稀釋

（1）按無菌操作法將檢樣25g（或25mL）放于含有225mL無菌水的細胞培養瓶中（瓶內預置適當數量的玻璃珠）或滅菌乳缽內，經充分振搖或研磨做成1：10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用無菌均質器，以8000～10000r/min的速度離心1min，做成1：10的稀釋液。

（2）用1mL滅菌吸管吸取1：10稀釋液1Ml，注入含有9mL無菌水的試管內，振搖混勻，做成1：100的稀釋液，換用1支lmL滅菌吸管，按上述操作依次作l0倍系列稀釋液。

（3）根據食品的衛生要求或對檢驗樣品污染情況的估計，選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種3管。也可直接用樣品接種。

2.乳糖初發酵試驗

即通常所說的假定試驗。其目的在于檢查樣品中有無發酵乳糖產生氣體的細菌。將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發酵管內，接種量在1mL以上者，用雙倍乳糖膽鹽發酵管；lmL及1mL以下者，用單倍乳糖膽鹽發酵管。每一個稀釋度接種3管，置36±1℃溫箱內，培養24±2h，如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣，則可報告為大腸菌群陰性，如有產氣者，則按下列程序進行。

3.分離培養

將產氣的發酵管分別劃線接種于伊紅美藍瓊脂平板，置36±1℃溫箱內培養18～24h，然后觀察菌落形態并作革蘭氏染色、鏡檢并作復發酵試驗。

4.乳糖復發酵試驗

即通常所說的證實試驗，其目的在于證明經乳糖初發酵試驗呈陽性反應的試管內分離到的革蘭陰性無芽胞桿菌，確能發酵乳糖產生氣體。在上述選擇性EMB培養基上，挑取可疑的大腸菌群菌落1～2個進行革蘭染色，同時接種乳糖發酵管，置36±l℃溫箱內培養24±2小時，觀察產氣情況。凡乳糖發酵管產氣，革蘭染色為陰性反應的無芽胞桿菌，即報告為大腸菌群陽性；凡乳糖發酵管不產氣或革蘭染色為陽性，則報告為大腸菌群陰性。

以上是利用細胞培養瓶檢測大腸桿菌群指標的操作方法，大腸桿菌是反映食品是否受污染的重要指標，掌握檢測方法是每一個食品檢測人員應該具備的基本技能。