細胞工廠培養細胞時細胞生長狀態受各種因素的影響,這些因素看似不起眼,若不注意就會導致細胞負傷慘重。那么,這些小細節究竟如何影響細胞生長,在培養細胞時我們又該如何避坑呢?今天的富道課堂,帶大家學習影響細胞生長的因素。
細胞工廠內細胞之間的接觸程度
正常細胞(二倍體)存在貼壁接觸抑制,長滿后細胞生長停止,而腫瘤細胞等非正常細胞,接觸抑制作用較弱,可生長至較高的細胞密度,但某些細胞過度生長,其損傷難以逆轉,所以培養細胞時不建議細胞密度太高。
劃重點:一般細胞匯合度達到 70-80% 即可傳代,切忌長得太滿。
細胞工廠內細胞生長附著物
貼壁細胞在正常情況下都會貼壁,但一些細胞本身貼壁不牢或貼壁性差,這個時候包被附著物能夠促進細胞的黏附,所以在培養一些特殊細胞時,需要對細胞工廠內進行包被后使用。常用的基質有多聚賴氨酸(D 型、L 型)、明膠、膠原蛋白、細胞外基質混合物,培養時可根據需要自行選擇。劃重點:細胞貼壁差時可使用基質包被細胞工廠內。
大多數細胞系在 pH7.4 左右時生長最好,而常規培養基的指示劑為酚紅,所以多數情況下,我們所見的培養基都呈紅色,但不同培養基的顏色會有差異,例如 DMEM 比 1640 顏色深一點。在培養細胞時,也可以根據培養基的顏色判斷細胞狀態,如隨著細胞生長,培養基顏色會變淺變黃。

劃重點:培養細胞時關注培養基顏色變化,發現異常及時處理。
細胞工廠內培養溫度
對于大部分人源細胞和溫血動物細胞系來講,比較適宜的培養溫度是 37℃,因為這個溫度接近體溫,但為了安全可以再稍低一些,細胞工廠內高于體溫的溫度要比低于體溫的溫度更易產生問題。對于禽類細胞,由于其體溫較高,所以培養溫度可以設置為 38.5℃左右。
劃重點:培養細胞時保持溫度穩定,不要長時間敞開培養箱的門,并且不要將培養器皿大量重疊堆放在培養箱中,避免空氣不循環。
細胞工廠內氣相組分
大部分培養基適合于 95% 空氣 5%CO2,但有部分培養基例外,如 L15 培養基適合于 100% 空氣,CO2 會導致培養液 PH 降低(培養液變黃),嚴重影響細胞生長;若需要用 L15 培養基培養細胞,但沒有 100% 空氣培養箱時,可以擰緊瓶蓋或換培養基(效果可能更好)培養。適用于 CO2 環境的培養基需保持培養瓶透氣。
劃重點:培養細胞時注意參照說明書選擇培養基,并注意培養壞境。
當然,影響細胞生長的因素還有很多,如細胞培養耗材選擇是否得當、質量是否過關等。富道細胞專注高端生物耗材的研發、生產與銷售,所有產品均按照 c-GMP 標準生產,遵循 ISO9001、ISO13485 質量管理體系要求,從原料、生產成型、表面處理、密封檢測、內包裝、外包裝、滅菌等方面層層把控,確保最終質量。
上一篇: 細胞工廠內細胞不貼壁的常見原因
下一篇: 富道細胞工廠各規格的培養面積