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細胞搖瓶多用于懸浮細胞的培養，常見規格包括125ml/250ml/500ml/1000ml等。在培養細胞時我們會可能會遇到細胞成簇的情況，這是什么原因導致的呢？

1、細胞搖瓶培養液中含鈣、鎂離子。因為鈣離子和鎂離子會影響胰酶的消化能力，導致胰酶消化能力下降，培養細胞時，消化的細胞數量有限，加上細胞的密度依賴性，所以細胞培養時最好使用不含有鈣鎂離子的PBS緩沖液。這個時候我們可以用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細胞，輕輕吹吸細胞獲得單細胞懸液。

2、支原體污染，這是細胞培養過程中常見的一種污染，由于支原體直徑很小，僅在180nm~350nm之間，只有通過電鏡才能看到。因此，支原體污染不易被實驗者肉眼發覺。而支原體污染是個循序的過程，普通抗生素對其無效。因此，被支原體污染的細胞會持續受到影響，導致實驗數據不準確。如發現支原體污染，丟棄培養物。

此外，如果細胞搖瓶內細胞成簇還有可能是蛋白酶過度消化使得細胞裂解引起的DNA污染，這個時候我們可以用DNase I處理細胞。總之，細胞成簇的原因是多方面的，我們需要分析具體情況，找出原因采取相應的解決辦法。